计算口径与参考文献
- 分子量 = Σ 脱氧单核苷酸(dNMP) − (n−1)×18.015（聚合链式，单链 DNA；原博客版误减 61.98/键，已修正）。
- Tm 最邻近法：SantaLucia 1998 统一 NN 参数，含 initiation、末端 A/T 罚项与自身互补对称罚项；盐校正 16.6·lg[Na⁺]，非自身互补时浓度按 Ct/4 近似。
- Tm 经验公式：von Ahsen et al. 2001（100.5 + 0.41×GC% − 820/n + 16.6·lg[Na⁺]），适用 14–70 nt、[Na⁺] 0.01–1.0 M。
- OD₂₆₀：按单链 DNA 惯例 1 OD₂₆₀ ≈ 33 μg 换算 nmol（原博客版为占位公式，已替换为真换算）。
- 三条 Tm 相互独立给出供交叉核对；引物设计请以试剂盒说明书推荐算法为准。