模板序列（可选）
计算口径与说明
- Tm 三种算法（Wallace / SantaLucia 1998 最邻近 / von Ahsen 2001 经验式）复用本站「寡核苷酸计算器」同一实现，判定取最邻近法结果。
- 发夹 / 自二聚体 / 交叉二聚体为几何法简化口径（序列与反向互补序列的最长连续配对 bp，环长≥3），非 primer3 全热力学计算——筛查连续互补用，精细 ΔG 请以专业设计软件为准。
- 判定阈值为常用经验范围（长度 18–25 nt、GC 40–60%、Tm 45–60 ℃、ΔTm≤2 ℃、3' 端 GC 1–2 个、单碱基连续≤3、连续配对≤3 bp）。Tm 窗按本站算法口径标定——比 primer3 默认读数系统性低 3–8 ℃，跨软件比对时请以同一算法为准。
- 模板定位：F 按原序列匹配正链，R 按其反向互补匹配正链；产物长度 = R 结合末端 − F 起始 + 1。
- 本工具只做评估、不做设计；引物最终请以试剂盒说明书与实验验证为准。